早在1000年以前，阿拉伯醫生Abulcasis（1013-1017）就發(fā)明了活檢技術(shù)?；顧z的好處是醫生可以根據病灶組織學(xué)結構對病情做出判斷。隨著(zhù)近幾年測序技術(shù)的發(fā)展，醫生可以對患者組織測序進(jìn)而給出更加精確的診斷結果。

　　但隨著(zhù)對腫瘤研究的深入，科學(xué)家發(fā)現在癌癥的診斷和治療過(guò)程中組織活檢技術(shù)有一定的局限性。主要表現為：腫瘤具有異質(zhì)性，對于癌細胞已經(jīng)發(fā)生轉移的患者而言，僅僅取某個(gè)部位的腫瘤組織，并不能反映患者的整體情況，但對所有的腫瘤組織都取樣檢測又不切實(shí)際；某些患者自身的情況決定了他不適合做組織活檢；受到手術(shù)的擾動(dòng)之后，有些腫瘤有加速轉移的風(fēng)險；組織活檢的滯后性對患者的治療也是不利的。因此對于癌癥的診斷和檢測技術(shù)有更高的要求。

　　液體活檢技術(shù)的出現，解決了上述的問(wèn)題，也提前了癌癥的診斷時(shí)間。這也是液體活檢技術(shù)被《麻省理工大學(xué)科技評論》評選為“2015年十大突破技術(shù)”的原因。

　　作為體外診斷的一個(gè)分支，液體活檢就是通過(guò)血液或者尿液等對癌癥等疾病做出診斷。其優(yōu)勢在于能通過(guò)非侵入性取樣降低活檢的危害，而且有效延長(cháng)患者生存期，性?xún)r(jià)比高。目前液體活檢的主要檢測物包括檢測血液中游離的循環(huán)腫瘤細胞（CTCs），循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）碎片，循環(huán)RNA（CirculatingRNA）和外泌體（攜帶有細胞來(lái)源相關(guān)的多種蛋白質(zhì)，脂類(lèi)，DNA，RNA等）。其中，ctDNA，RNA和外泌體是腫瘤細胞自身分泌或死亡時(shí)釋放的物質(zhì)。

　　下面我們對液體活檢檢測物及研究進(jìn)展做簡(jiǎn)要的介紹。

　　液體活檢主要檢測物

　　循環(huán)腫瘤細胞(CirculatingTumorCells，CTCs)

　　1869年，澳大利亞籍醫生Ashworth首次提出循環(huán)腫瘤細胞（CirculatingTumorCells，CTCs）的概念。1976年，Nowell將CTCs的定義修正為來(lái)源于原發(fā)腫瘤或轉移腫瘤，獲得脫離基底膜的能力并通過(guò)組織基質(zhì)進(jìn)入血管的腫瘤細胞。目前，CTCs是指存在于外周血中的各類(lèi)腫瘤細胞的統稱(chēng)。CTCs以不同形態(tài)存在于外周血中，既有游離的單個(gè)CTCs，也有聚集成團的細胞團（CTM，CirculatingTumorMicroemboli），腫瘤細胞在進(jìn)入外周血循環(huán)的過(guò)程中會(huì )發(fā)生上皮-間質(zhì)轉變（EpithelialMesenchymalTransition，EMT）。

　　CTCs轉移過(guò)程中必經(jīng)階段：

　　CTCs通過(guò)從腫瘤組織中脫落游走至血管，穿過(guò)血管進(jìn)入血循環(huán)，克服自身及血循環(huán)中各種因素的殺傷作用，到最后定植形成新的轉移灶等多個(gè)生理步驟，使得CTCs可順利侵襲轉移從而促進(jìn)相關(guān)疾病的進(jìn)展。

　　CTCs的檢測：

　　對CTCs檢測包含細胞富集和細胞檢測兩部分，可以進(jìn)行不同的組合，形成不同的技術(shù)。最常見(jiàn)的富集方法是抗體介導或物理方法富集，接下來(lái)進(jìn)行免疫組織化學(xué)計數或遺傳分析。

　　A行顯示了磁珠-抗體富集方法；B行顯示了物理富集方法；C行顯示了最常用的細胞檢測方法。

　　血漿游離腫瘤DNA('Cell-Free'CirculatingTumorDNA，ctDNActDNA（circulatingtumorDNA）即循環(huán)腫瘤DNA是人體血液循環(huán)系統中不斷流動(dòng)的攜帶一定特征（包括突變，缺少，插入，重排，拷貝數異常，甲基化等）來(lái)自腫瘤基因的DNA片段。一般來(lái)源于壞死或凋亡的腫瘤細胞，循環(huán)腫瘤細胞和腫瘤細胞分泌的外排體，但是在了解ctDNA之前，我們要知道另一個(gè)與之相關(guān)的概念—cfDNA。

　　cfDNA（cell-freeDNA），或者叫血漿游離DNA，是血漿中游離存在的DNA，它們有的來(lái)自于正常細胞，有的來(lái)自于異常細胞（如腫瘤細胞），還有部分來(lái)自于我們外部（如病毒DNA）。

　　ctDNA的檢測：

　　數字PCR

　　將一個(gè)標準PCR反應分配到大量微小的反應器中，在每個(gè)反應器中包含或不包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的目標分子(DNA模板)，實(shí)現“單分子模板PCR擴增”，擴增結束后，通過(guò)陽(yáng)性反應器的數目“數出”目標序列的拷貝數。

　　BEAMing技術(shù)

　　結合數字PCR與流式技術(shù)，利用特異性PCR引物擴增目標突變區后，與磁珠（磁珠上固定有特異的PCR引物）混合進(jìn)行油包水單分子擴增反應。反乳化作用后，利用不同顏色的熒光探針結合磁珠上的PCR產(chǎn)物，發(fā)出紅色或綠色熒光，再利用流式細胞儀分析磁珠顏色來(lái)確定突變情況。

　　液體活檢的研究進(jìn)展

　　液體活檢—治愈癌癥的可靠保障

　　近日，哈佛醫學(xué)院丹娜法伯癌癥研究院領(lǐng)導合作研究小組成功證實(shí)了液體活檢技術(shù)作為臨床工具識別特定病人的可行性。這種簡(jiǎn)單液體活檢技術(shù)可快速且精準地檢測導致非小細胞肺癌(NSCLC)的兩種關(guān)鍵基因致病突變，進(jìn)而幫助臨床醫生為病人制定針對上述兩種突變的化療藥單，提高非小細胞肺癌的臨床治療水平。“我們認為血漿基因分型在臨床測試中具有不可估量的應用潛力，這種癌癥常規基因印記的快速與無(wú)創(chuàng )篩查可以避免對傳統侵入性的活組織檢查的挑戰。”丹娜法伯/布列根女性醫院肺癌專(zhuān)家GeoffreyOxnard博士說(shuō)。（原文：ProspectiveValidationofRapidPlasmaGenotypingfortheDetectionofEGFRandKRASMutationsinAdvancedLungCancer）

　　SciTranslMed：“液體活檢”可捕捉癌性突變

　　新國際著(zhù)名雜志ScienceTranslationalMedicine在線(xiàn)刊登的一項新的研究報告中指出，一種新的基因測序技術(shù)可能比用傳統的腫瘤活檢技術(shù)檢測癌性突變更安全及廉價(jià)。這種叫做"TAm-Seq"的技術(shù)可通過(guò)收集血漿中循環(huán)DNA片段，放大與癌癥相關(guān)的DNA部分并深入挖掘基因序列來(lái)發(fā)現那些難以辨認的突變。TimForshew及其同事分析了來(lái)自一組晚期卵巢癌病人的腫瘤樣本并發(fā)現，有67%的病人帶有腫瘤抑制基因TP53的突變。

　　Cell：新型血檢技術(shù)或可擴大液體活檢的范圍

　　發(fā)表在Cell上的一篇報道中，華盛頓大學(xué)的科學(xué)家表示他們開(kāi)發(fā)了一種新方法可以克服當前液體活檢技術(shù)的局限性，從而幫助鑒別哪些類(lèi)型的細胞可以產(chǎn)生游離DNA；這種方法依賴(lài)于對個(gè)體機體中游離DNA的片段譜系的分析并將這種譜系信息同細胞多種死亡生理條件進(jìn)行對比，可以擴大液體活檢的檢測范圍。

　　液體活檢技術(shù)使得癌癥早期階段的篩查成為可能，無(wú)論是腫瘤診斷，治療還是監控領(lǐng)域，液體活檢的優(yōu)勢都使其成為最具發(fā)展潛力的腫瘤無(wú)創(chuàng )診斷手段，具有極高的臨床應用價(jià)值和市場(chǎng)前景。