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擴大CRISPR-Cas9技術(shù)可用性!請增加靶點(diǎn)范圍

2015-11-06 來(lái)源:健客網(wǎng)社區  標簽: 掌上醫生 喝茶減肥 一天瘦一斤 安全減肥 cps聯(lián)盟 美容護膚
摘要:文章中研究者報道了一種金黃色葡萄球菌Cas9酶類(lèi)—SaCas9酶類(lèi)突變體,該突變體可以識別更廣范圍的核苷酸序列,這或許就可以幫助CRISPR-Cas9技術(shù)對此前無(wú)法靶向作用的基因組位點(diǎn)進(jìn)行靶向作用。

  近日,來(lái)自麻省總醫院(MassachusettsGeneralHospital)的學(xué)者們通過(guò)研究表示,一種用來(lái)改善基因編輯工具CRISPR-Cas9RNA引導核酸酶可用性和精確性的方法或許可以應用于其它細菌的Cas9酶中,相關(guān)研究發(fā)表于國際雜志NatureBiotechnology上。

  文章中研究者報道了一種金黃色葡萄球菌Cas9酶類(lèi)—SaCas9酶類(lèi)突變體,該突變體可以識別更廣范圍的核苷酸序列,這或許就可以幫助CRISPR-Cas9技術(shù)對此前無(wú)法靶向作用的基因組位點(diǎn)進(jìn)行靶向作用。

  研究者BenjaminKleinstiver博士指出,具有更廣泛靶向范圍的Cas9突變體的構建對于基因組序列的精準靶向應用非常重要,SaCas9的編碼序列要比SpCas9小23%;SpCas9是釀膿鏈球菌的衍生版本,這兩種酶類(lèi)的編碼尺寸的差異就使得SaCas9或許可以進(jìn)行潛在的治療應用。

  CRISPR-Cas9核酸酶由一段短鏈的RNA分子(20個(gè)可以同DNA序列配對的核苷酸)和Cas9細菌酶類(lèi)(可以在理想位點(diǎn)對DNA進(jìn)行切割)組成;這項研究中,研究人員將研究重點(diǎn)轉向了SaCas9酶類(lèi),天然狀態(tài)下SaCas9酶類(lèi)需要前間區序列鄰近基序(PAM)序列—NNGRRT序列,這樣R基團就可以是腺嘌呤或鳥(niǎo)嘌呤,而T基團則必須是胸腺嘧啶,NNGRRT序列就會(huì )靠近靶向DNA序列,利用此前研究中描述的分子進(jìn)化系統技術(shù),研究人員就成功地開(kāi)發(fā)出了名為KKHSaCas9的突變體,其可以在第三個(gè)位點(diǎn)識別攜帶任何核苷酸的PAM序列,從而增加2-4倍的靶向范圍,該系統在不需要SaCas9的精確結構的前提下就可以對PAM特異性進(jìn)行工程性地修飾改變。

  最后研究者J.KeithJoung博士表示,如今我們利用定向的進(jìn)化方法就可以用來(lái)修飾酶類(lèi)SaCas9的PAM序列特異性,這就擴大了Cas9酶類(lèi)可獲取靶向作用的基因位點(diǎn)的數量,精確靶向作用位點(diǎn)的能力對于研究人員非常關(guān)鍵。

  本文中研究人員認為這種定向進(jìn)化手段為改變很多細菌中存在的Cas9核酸酶識別的特性提供了重要的線(xiàn)索,也為后期深入擴展新型基因編輯工具的可用性提供了幫助。

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