來(lái)自荷蘭Hubrecht研究所和烏特勒支醫學(xué)中心（UMC Utrecht）、麻省理工學(xué)院的研究人員稱(chēng)，他們開(kāi)發(fā)出了一種自身克隆CRISPR/Cas9（scCRISPR）技術(shù)，可以繞開(kāi)基因編輯過(guò)程中所有的克隆步驟，在數小時(shí)內完成CRISPR/Cas9介導基因突變及位點(diǎn)特異性轉基因敲入。他們的研究成果發(fā)布在10月29日的《Stem Cell Reports》雜志上。
CRISPR序列源于原核生物的一種獲得性免疫系統，協(xié)同Cas（CRISPR-associated）蛋白家族參與抵抗噬菌體或其他病毒的二次感染，廣泛存在于細菌和古細菌中。目前已發(fā)現三種不同類(lèi)型的CRISPR/Cas系統。
當前，研究人員已將II型CRISPR/Cas系統——CRISPR/Cas9系統改造成為了一種高效的新型基因組編輯工具，它能夠以一種位點(diǎn)特異性方式在培養細胞和整個(gè)生物體中實(shí)現定向修飾（突變、刪除、添加、激活、抑制）特定基因序列?，F已在人類(lèi)、小鼠、斑馬魚(yú)、酵母、細菌、果蠅，線(xiàn)蟲(chóng)、擬南芥等物種中得到廣泛應用。
在CRISPR介導的基因組編輯中，人們設計出一條可靶向目的基因組位點(diǎn)的單導向RNA sgRNA）發(fā)夾結構，Cas9蛋白在這條sgRNA的引導下完成對DNA的切割。定點(diǎn)誘變和靶向轉基因是發(fā)育和疾病研究中重要的手段之一，能夠輕易地編輯所有基因組位點(diǎn)可徹底地改變遺傳和干細胞研究。
目前，CRISPR/Cas9打靶要求為每個(gè)新位點(diǎn)克隆出一個(gè)位點(diǎn)特異性sgRNA質(zhì)粒，要在大約1周的時(shí)間內完成質(zhì)粒連接、轉化、純化和序列驗證等多個(gè)耗時(shí)且費錢(qián)的步驟。這阻礙了需要進(jìn)行大規模sgRNA篩查的多重及高通量基因組編輯應用。此外，采用CRISPR/Cas9敲入轉基因仍然需要費時(shí)地構建通常具有600-6,000 bp同源臂的同源性載體，這一辛苦費力的過(guò)程阻礙了建立基因敲入細胞系。這些障礙抑制了大規模靶向基因組操控革命性的潛力。
在這篇新文章中，研究人員提出了一種替代性sgRNA和同源性載體生成新方法，其無(wú)需克隆質(zhì)粒，因此大大縮短了時(shí)間，減輕了工作量及CRISPR/Cas9介導基因組編輯的成本，而維持了位點(diǎn)特異性突變和轉基因插入的高效率。
這種scCRISPR技術(shù)無(wú)需為每個(gè)靶位點(diǎn)克隆出一條位點(diǎn)特異性的sgRNA或基因敲入同源性載體，可在數小時(shí)內完成CRISPR/Cas9介導基因組突變或位點(diǎn)特異性的轉基因敲入。研究人員稱(chēng)他們將一種自我切割的回文結構sgRNA質(zhì)粒，和一條編碼所需位點(diǎn)特異性sgRNA的雙鏈DNA短序列導入到靶細胞中，使得它們能夠通過(guò)同源重組生成位點(diǎn)特異性sgRNA質(zhì)粒。每個(gè)靶位點(diǎn)只需2小時(shí)準備時(shí)間，相比于基于質(zhì)粒構建sgRNA，scCRISPR可以低近6倍的成本有效地實(shí)現基因敲除（突變率達到88%）。隨后，研究人員在小鼠和人類(lèi)胚胎干細胞（ESCs）及HEK293T細胞中證實(shí)了它們的基因組編輯效率。
這種新方法大大簡(jiǎn)化了生成靶向轉基因或基因敲除細胞系的過(guò)程，且不影響效率，由此為大規?；蚪M編輯和篩查應用提供了一個(gè)理想的平臺。
用于各型精神分裂癥，更適用于病情緩解者的維持治療。
健客價(jià)： ￥15本品適用于有胃腸道功能或部分胃腸道功能而不能或不愿吃足夠數量的常規食物以滿(mǎn)足機體營(yíng)養需求的腸內營(yíng)養治療的病人，主要用于： 1． 代謝性胃腸道功能障礙 -胰腺炎 -腸道炎性疾病 -放射性腸炎和化療 -腸瘺 -短腸綜合征 -艾滋病病毒/艾滋病 2． 危重疾病 -大面積燒傷 -創(chuàng )傷 -膿毒血癥 -大手術(shù)后的恢復期 3． 營(yíng)養不良病人的手術(shù)前喂養 4． 腸道準備 本品能用于糖
健客價(jià)： ￥95解毒，消腫，止痛。用于中、晚期腫瘤，慢性乙型肝炎等癥。
健客價(jià)： ￥175本品可用于由敏感菌引起的輕、中度感染，包括1、呼吸系統感染：如急性咽炎、急性扁桃體炎、中耳炎、副鼻竇炎、支氣管炎、支氣管擴張合并感染、肺炎等；2、腸道感染：如細菌性痢疾、傷寒、感染性腸炎、沙門(mén)氏菌腸炎等； 3、膽道感染：如膽囊炎、膽管炎等；4、泌尿生殖系統感染：如膀胱炎、腎盂腎炎、前列腺炎、淋菌性尿道炎、非淋菌性尿道炎、子宮附件炎、子宮內感染、子宮頸炎、前庭大腺炎等及由溶脲脲原體、沙眼衣原體所致的
健客價(jià)： ￥42益腎固精，縮尿，止濁。用于遺精滑精，遺尿尿頻，小便白濁。
健客價(jià)： ￥442治療肝炎藥。用于慢性乙型肝炎。
健客價(jià)： ￥6.8解毒，消腫，止痛。用于中、晚期腫瘤，慢性乙型肝炎等癥。
健客價(jià)： ￥178用于口腔、胃腸道、陰道以及皮膚粘膜的念珠菌感染，常與廣譜抗生素合用，以防止真菌引起二重感染。
健客價(jià)： ￥37口服用于治療消化道念珠菌病。
健客價(jià)： ￥79傷寒和其他沙門(mén)菌屬感染：為敏感菌株所致傷寒、副傷寒的選用藥物，由沙門(mén)菌屬感染的胃腸炎一般不宜應用本品，如病情嚴重，有合并敗血癥可能時(shí)仍可選用等。請詳見(jiàn)小盒。
健客價(jià)： ￥26主要用于金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌等所致的呼吸道感染及皮膚、軟組織感染；也可用于支原體肺炎。
健客價(jià)： ￥18主要用于金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌等所致的呼吸道感染及皮膚、軟組織感染，也可用于支原體肺炎。
健客價(jià)： ￥18大環(huán)內酯類(lèi)抗生素?？咕秶c紅霉素相似，主要用于金黃葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌等所致的呼吸道感染及皮膚、軟組織感染，也可用于支原體肺炎。
健客價(jià)： ￥18.9用于慢性肝炎及原發(fā)性肝癌。
健客價(jià)： ￥25主要適用于金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌等所致的呼吸道感染及皮膚、軟組織感染，也可用于支原體肺炎。
健客價(jià)： ￥7主要適用于金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌等所致的呼吸道感染及皮膚、軟組織和膽道感染，也可用于支原體肺炎。
健客價(jià)： ￥18用于對其敏感的致病菌引起的下列感染，包括：1下呼吸道感染：如支氣管炎、肺炎等；2、上呼吸道感染，如咽炎、鼻竇炎等；3、皮膚及軟組織感染，如毛囊炎、蜂窩組織炎、丹毒等。
健客價(jià)： ￥9適用于克拉霉素敏感菌所引起的下列感染：1.鼻咽感染。2.下呼吸道感染。3.皮膚軟組織感染。4.急性中耳炎、肺炎支原體肺炎、沙眼衣原體引起的尿道炎及宮頸炎等。
健客價(jià)： ￥10.8克拉霉素適用于對其敏感的致病菌引起的下列感染，包括：1下呼吸道感染：如支氣管炎、肺炎等；2、上呼吸道感染，如咽炎、鼻竇炎等；3、皮膚及軟組織感染，如毛囊炎、蜂窩組織炎、丹毒。
健客價(jià)： ￥7本品適用于克拉霉素敏感菌所引起的下列感染：1.鼻咽感染：扁桃體炎、咽炎、副鼻竇炎；2.下呼吸道感染：包括支氣管炎、細菌性肺炎、非典型肺炎；3.皮膚感染，膿皰病、丹毒、毛囊炎、癤和傷口感染。
健客價(jià)： ￥7立克次體病，包括流行性斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、洛磯山熱、恙蟲(chóng)病和Q熱。支原體屬感染。衣原體屬感染，包括鸚鵡熱、性病、淋巴肉牙腫、非特異性尿道炎、輸卵管炎、宮頸炎及沙眼?；貧w熱。布魯菌病霍亂。兔熱病。鼠疫。軟下疳。
健客價(jià)： ￥601．本品作為選用藥物可用于下列疾?。?1)立克次體病，包括流行性斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、洛磯山熱、恙蟲(chóng)病和Q熱。(2)支原體屬感染。(3)衣原體屬感染，包括鸚鵡熱、性病、淋巴肉牙腫、非特異性尿道炎、輸卵管炎、宮頸炎及沙眼。(4)回歸熱。(5)布魯菌病。(6)霍亂。(7)兔熱病。(8)鼠疫。(9)軟下疳。治療布魯菌病和鼠疫時(shí)需與氨基糖苷類(lèi)聯(lián)合應用。 2．由于目前常見(jiàn)致病菌對本品耐藥現象嚴重，
健客價(jià)： ￥81．本品作為選用藥物可用于下列疾?。?1)立克次體病，包括流行性斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、洛磯山熱、恙蟲(chóng)病和Q熱。(2)支原體屬感染。(3)衣原體屬感染，包括鸚鵡熱、性病、淋巴肉牙腫、非特異性尿道炎、輸卵管炎、宮頸炎及沙眼。(4)回歸熱。(5)布魯菌病。(6)霍亂。(7)兔熱病。(8)鼠疫。(9)軟下疳。治療布魯菌病和鼠疫時(shí)需與氨基糖苷類(lèi)聯(lián)合應用。2．由于目前常見(jiàn)致病菌對本品耐藥現象嚴重，僅在病原
健客價(jià)： ￥6.491.化膿性鏈球菌引起的急性咽炎、急性扁桃體炎。 2.敏感細菌引起的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作。 3.肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌以及肺炎支原體所致的肺炎。 4.沙眼衣原體及非多種耐藥淋病奈瑟菌所致的尿道炎和宮頸炎。 5.敏感細菌引起的皮膚軟組織感染。
健客價(jià)： ￥8.5
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