最近，來(lái)自深圳大學(xué)生命與海洋科學(xué)學(xué)院茍德明教授領(lǐng)導的研究團隊在Nature雜志子刊ScientificReports上發(fā)表了一篇最新研究進(jìn)展，他們利用S-Poly(T)Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR對microRNA的檢測方法進(jìn)行了改進(jìn)。

　　MicroRNA(miRNA)是一類(lèi)長(cháng)約22個(gè)核苷酸非編碼小RNA，廣泛存在于真核生物。miRNA的主要功能是通過(guò)與mRNA的3’端非翻譯區結合，降解靶mRNA或者阻止其翻譯，從而在轉錄后水平上抑制基因的表達，廣泛參與細胞的分化，增殖，凋亡，個(gè)體生長(cháng)發(fā)育以及器官形成等生物學(xué)過(guò)程。生物體內miRNA被精密調控，其表達具有嚴格的時(shí)空特異性。研究表明miRNA的表達異常與許多癌癥或者其他疾病的發(fā)生密切相關(guān)，而且miRNA可以在血液中以非常穩定的形式存在。所以循環(huán)miRNA作為新型生物標記物有著(zhù)巨大的潛力，可用于癌癥等重大疾病的早期診斷和預后評估等。然而，由于血液中的miRNA含量甚微，對檢測的靈敏度和特異性要求很高。

　　基于實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)的檢測技術(shù)一直被認為是最靈敏的miRNA檢測手段之一。目前，用qRT-PCR技術(shù)檢測miRNA包括比較常用的poly(A)加尾法和莖環(huán)引物(Stemloop)法。由茍德明教授研究團隊早期發(fā)明的S-Poly(T)？法融合了傳統的Stem-loop法和Poly(A)加尾法的優(yōu)點(diǎn)，使用了與miRNA3`端特異互補的~6個(gè)堿基和11個(gè)Oligod(T)組成的S-Poly(T)？特異性逆轉錄引物，在較高溫度下(≥42°C)對加尾后的miRNA進(jìn)行第一鏈cDNA的合成，不僅顯著(zhù)提高S-Poly(T)逆轉錄引物與目的miRNA互補結合的特異性和熱穩定性，而且逆轉錄效率更高，從而大幅提高目的miRNA第一鏈cDNA的合成及后續qPCR效率。但是在S-Poly(T)方法中，miRNA的Poly(A)加尾和反轉錄是兩步獨立的反應，因此在操作簡(jiǎn)便性和逆轉錄效率方面有待改進(jìn)和提高。

　　最新發(fā)表在ScientificReports的S-Poly(T)Plus技術(shù)是對S-Poly(T)的進(jìn)一步升級，將原本分開(kāi)的加尾和逆轉錄兩步反應同時(shí)進(jìn)行，不僅操作簡(jiǎn)便，降低RNA降解的風(fēng)險，縮短檢測時(shí)間，而且提高了檢測的靈敏度（約4倍）。研究人員又通過(guò)一種改進(jìn)的總RNA分離方法進(jìn)一步提高了循環(huán)miRNA檢測的靈敏度。通過(guò)對各項指標的優(yōu)化，提出了循環(huán)microRNA檢測的整體解決方案，從100μl血清或血漿中可以實(shí)現200~300個(gè)miRNA的檢測，是目前國際上最靈敏的microRNA檢測方法，特別適合于尋找與人類(lèi)重大疾病相關(guān)的循環(huán)microRNA生物標志物。

　　為對這一改良方法進(jìn)行驗證，研究人員利用該方法對患有先天性心臟病合并肺動(dòng)脈高壓患者的血清進(jìn)行了miRNA表達譜定量分析，結果在該病人群體中發(fā)現了2個(gè)顯著(zhù)上調的miRNA和5個(gè)顯著(zhù)下調的miRNA，證明了該方法具有很好的應用價(jià)值。

　　綜上所述，深圳大學(xué)茍德明教授研究團隊開(kāi)發(fā)的這種簡(jiǎn)單，靈敏同時(shí)具有良好特異性的循環(huán)系統miRNA檢測方法為miRNA基礎研究和基于miRNA生物標記物的人類(lèi)疾病診斷提供了新的工具，對于進(jìn)一步探索miRNA的奧秘具有重要推動(dòng)意義。