骨質(zhì)疏松癥是一種全身性、代謝性骨骼系統疾病，其病理特征為骨量降低、骨微細結構破壞、骨脆性增加，骨強度下降，易發(fā)生骨折；與年齡、性別、種族等因素密切相關(guān)，絕經(jīng)后婦女多發(fā)。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松（POP）是由于婦女絕經(jīng)后，卵巢功能衰退，體內雌激素水平隨之下降，雌激素的骨骼效應消除后，破骨細胞的骨吸收大于成骨細胞的骨形成作用導致的骨質(zhì)疏松。近年來(lái)，流行病學(xué)研究發(fā)現阿司匹林可提高老年人的骨密度，從而推斷其可治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥，在此方面，實(shí)驗研究取得了一定進(jìn)展。阿司匹林是一種老藥，不但副作用較少、廉價(jià)，而且治療疾病的范圍廣。因此探討阿司匹林對骨質(zhì)疏松的作用及其機制意義重大，筆者將對阿司匹林治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的實(shí)驗研究進(jìn)展做一綜述。

　　POP動(dòng)物模型的構建

　　目前構建POP的動(dòng)物模型多使用Sprague-Dawley（SD）或者Wistar雌性大鼠，在適當的實(shí)驗條件下適應一段時(shí)間，通過(guò)摘除雙側卵巢模擬女性絕經(jīng)，摘除卵巢后的雌性大鼠，因雌激素下降，形成以松質(zhì)骨丟失為主的高轉換型骨質(zhì)疏松癥，這一特點(diǎn)與臨床絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的病理機制相似。

　　阿司匹林治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的實(shí)驗研究

　　1、在體實(shí)驗

　　在體實(shí)驗研究發(fā)現，阿司匹林對骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度、骨組織形態(tài)學(xué)及骨生物力學(xué)、骨代謝指標等均有調節作用。

　?。?）提高骨密度

　　Yamaza等用低劑量阿司匹林研究其對去勢鼠的骨密度影響。對3月齡的去勢鼠進(jìn)行為期3個(gè)月低劑量阿司匹林治療，然后使用顯微CT分析發(fā)現，阿司匹林治療組顯著(zhù)改善去勢小鼠骨小梁和皮質(zhì)骨密度。

　　Chen等通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗探討阿司匹林對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的治療作用。將40只3月齡SD雌性大鼠隨機分成5組:對照組(Sham)、去勢組(OVX)及3個(gè)阿司匹林治療組(Aspirin)。OVX及Aspirin組采用卵巢切除法去勢,飼養3個(gè)月建立骨質(zhì)疏松模型。3個(gè)阿司匹林治療組分別為8.93、26.79及80.36mg/kg(A1、A2及A3)，每天灌胃一次，連續灌胃3個(gè)月，Sham組和 OVX 組每天用等量的生理鹽水灌胃3個(gè)月。雙能X線(xiàn)吸收骨密度測量?jì)x(DXA)及Micro-CT測量結果顯示：3個(gè)阿司匹林治療組腰4椎體骨密度、骨小梁厚度、骨小梁數量均顯著(zhù)高于OVX組,且與Sham組相近。表明阿司匹林可以有效地促進(jìn)大鼠絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松骨小梁的改建,改善骨小梁的三維結構,增加骨質(zhì)的骨密度。

　　Huang等通過(guò)去勢大鼠骨質(zhì)疏松性骨折愈合模型，探討阿司匹林對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的影響。將60只3月齡雌性Wistar大鼠，隨機分成去勢組50只，假手術(shù)組5只和空白組5只，構建去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型。確認模型成功后，將去勢組大鼠全部造成左側股骨中點(diǎn)骨折，用克氏針髓內固定。再將制成骨折模型的50只大鼠，隨機分成A組和B組(每組25只)，A組給予阿司匹林灌胃，33mg/次，1次/d，B組給予等量生理鹽水。兩組分別于骨折術(shù)后測定骨密度值，然后處死取骨痂，行骨痂組織學(xué)檢查，8、12周行放射學(xué)觀(guān)察。兩組剩余的5只大鼠于12周時(shí)行左股骨生物力學(xué)測定。結果顯示阿司匹林組各時(shí)間點(diǎn)骨密度均高于對照組，差異有統計學(xué)意義。

　?。?）改善骨組織形態(tài)學(xué)及骨生物力學(xué)

　　Chen等通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗也證實(shí)阿司匹林可以有效地促進(jìn)大鼠絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松骨小梁的改建,改善骨小梁的三維結構,增加骨質(zhì)的骨密度和力學(xué)強度。HUANG等實(shí)驗結果顯示，組織學(xué)觀(guān)察到HE染色,阿司匹林組軟骨內成骨過(guò)程較對照組加快;生物力學(xué)測定顯示，術(shù)后12周,阿司匹林組左側股骨的三點(diǎn)彎曲載荷高于對照組,差異有統計學(xué)意義。從而證明阿司匹林能夠促進(jìn)去勢大鼠骨質(zhì)疏松性骨折愈合,增加骨質(zhì)的骨密度和生物力學(xué)強度。

　　Yao等觀(guān)察阿司匹林對于趨勢大鼠骨質(zhì)疏松的影響，探究不同劑量及不同時(shí)期口服阿司匹林對骨質(zhì)疏松的輔助治療作用。取42只6個(gè)月齡的雌性wistar大鼠,隨機選取6只作為假手術(shù)組(A),余36只作為去勢組。去勢組分為阿司匹林預防組:去勢對照組(B),去勢阿司匹林(8.92 mg/kg)組(C),去勢阿司匹林(26.75 mg/kg)組(D)和阿司匹林治療組:去勢對照(E),阿司匹林(8.92 mg/kg)組(F),阿司匹林組(26.75 mg/kg)組(G)。預防組于去勢后3 d給予不同劑量阿司匹林灌胃,治療組于去勢后12周灌胃。對42只大鼠雙側股骨干進(jìn)行取材,對雙側股骨干行生物力學(xué)測定。結果顯示預防部分與治療部分的去勢對照組較假手術(shù)組、去勢8.92 mg/kg組及去勢26.75 mg/kg的三點(diǎn)彎曲載荷顯著(zhù)降低。預防組與治療組同劑量間比較,預防組的最大破壞應力指標高于治療組。表明早期應用阿司匹林能增加去勢大鼠的骨密度,增加骨質(zhì)生物力學(xué)強度。

　　Wang等研究阿司匹林對去勢大鼠腰椎微觀(guān)結構的影響。取48只3月齡SD雌性大鼠隨機分為6組:去勢組(OVX組)、對照組(Sham組)及4個(gè)阿司匹林治療組(Aspirin組),每組8只。OVX組及Aspirin組采用卵巢切除法建立骨質(zhì)疏松模型。去勢后1周,阿司匹林治療組劑量分別為2.25、4.46、8.92及26.75 mg/kg(A1、A2、A3及A4組),每天灌胃一次,OVX組及Sham組予同等量生理鹽水灌胃。灌胃3個(gè)月后處死取腰椎椎體,以Micro-CT進(jìn)行測量分析。Micro-CT分析表明:與OVX組比較,阿司匹林各劑量組骨體積分數（BV/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁數量（Tb.N）、骨密度（BMD）均顯著(zhù)性提高,骨表面積骨體積比（BS/BV）、骨小梁分離度（Tb.Sp）顯著(zhù)性降低,阿司匹林各劑量組BV/TV、BS/BV、Tb.Th、Tb.N、Tb.Sp、BMD與Sham組相比有統計學(xué)差異。表明阿司匹林可以改善去勢大鼠骨小梁結構,增加骨質(zhì)密度,對去勢大鼠骨質(zhì)疏松具有防治作用。

　?。?）改善骨代謝生化指標

　　Wang等研究阿司匹林預防去勢大鼠骨質(zhì)疏松的作用及機制。實(shí)驗動(dòng)物分組及干預同文獻，去勢大鼠灌胃3個(gè)月后觀(guān)察血清骨源性堿性磷酸酶及骨鈣素水平。結果顯示與OVX組比較,8.92及26.75 mg/kg劑量阿司匹林組骨源性堿性磷酸酶顯著(zhù)降低。4.46、8.92及26.75 mg/kg劑量阿司匹林組骨鈣素與Sham組相比顯著(zhù)升高。提示阿司匹林治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的發(fā)生機制可能是通過(guò)抑制骨吸收及刺激骨形成發(fā)揮作用。

　?。?）調節相關(guān)細胞因子表達

　　Yang等探討阿司匹林對去卵巢骨質(zhì)疏松模型鼠體內白細胞介素-1(IL-1)、IL-6、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)表達的影響,以及其防治骨質(zhì)疏松的作用。選取Sprague-Dawley大鼠60只,隨機分為對照組(10只)和去卵巢模型組(50只),術(shù)后1周去卵巢模型組大鼠再隨機分為骨質(zhì)疏松組,其中A組(0.25 mmol/L阿司匹林)、B組(0.5 mmol/L)、C組(1.0 mmol/L)和D組(1.5 mmol/L),各10只。檢測各組血清和骨組織IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF水平,同時(shí)采用Micro-CT對骨小梁微觀(guān)三維形態(tài)結構進(jìn)行分析。結果骨質(zhì)疏松組血清IL-1,IL-6,TNF-α,M-CSF分別為(80.15±7.18)pg/m L、(82.16±6.63)pg/m L、(30.21±4.73)pg/m L和(11.42±4.25)pg/m L,均明顯高于對照組。A,B,C,D組中,D組IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF水平最低。骨質(zhì)疏松組骨組織IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF分別為(71.24±8.10)pg/m L、(78.02±5.15)pg/m L、(26.92±3.23)pg/m L和(10.22±3.15)pg/m L,均明顯高于對照組；A,B,C,D組中,D組IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF水平最低。提示阿司匹林能抑制去勢大鼠骨流失,這可能與阿司匹林抑制大鼠血清和骨組織IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF的表達有關(guān),從而使破骨活動(dòng)減弱的作用。

　　2、離體實(shí)驗

　?。?）促進(jìn)成骨細胞表達

　　Feng等通過(guò)體外試驗研究阿司匹林對骨髓基質(zhì)細胞成骨性分化的影響。培養SD大鼠骨髓基質(zhì)細胞(BMSCs),傳代3次后進(jìn)行成骨誘導分化,誘導培養基中加入不同濃度阿司匹林(0.5、1、2、5、10mmol/L),同時(shí)設立對照組。采用cck-8法分析細胞增殖情況。比較阿司匹林組與對照組在細胞堿性磷酸酶(ALP)活性、骨鈣素(OC)分泌量、鈣結節染色等方面的成骨性差異。結果顯示阿司匹林無(wú)促進(jìn)細胞增殖活性,而高濃度阿司匹林能夠強烈抑制細胞增殖。0.5、1、2mmol/L濃度阿司匹林可促進(jìn)BMSCs的成骨性分化,中低濃度組堿性磷酸酶含量、骨鈣素分泌量在不同階段顯著(zhù)高于對照組。14天茜素紅染色可見(jiàn)中低濃度組鈣結節數量高于對照組。提示中低濃度阿司匹林作用于骨髓基質(zhì)細胞可促進(jìn)其成骨細胞特性表達,表明阿司匹林有促進(jìn)骨代謝合成的作用。

　?。?）抑制破骨細胞分化成熟

　　Zhang等研究不同濃度阿司匹林對體外培養大鼠破骨細胞(Osteoclast,OC)分化成熟及骨吸收活性的影響。建立由核激活因子受體配體(RANKL)和巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)共同作用的大鼠破骨細胞骨髓誘導體系,將雌激素和不同濃度的阿司匹林(0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、1.5 mmol/L)分別作用于破骨細胞。誘導培養后分別對破骨細胞進(jìn)行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,觀(guān)察細胞形態(tài),并計數破骨樣細胞數量;將各組破骨細胞接種于骨磨片上,建立破骨細胞-骨磨片活性分析模型,于不同時(shí)間點(diǎn)對骨磨片進(jìn)行光鏡和掃描電鏡觀(guān)察,分析計算骨吸收陷窩面積。結果顯示隨著(zhù)阿司匹林濃度的增加,阿司匹林組TRAP陽(yáng)性多核破骨細胞數量、骨吸收陷窩面積逐漸減少直至消失。與雌激素組相比,低濃度阿司匹林組(0.25mmol/L)沒(méi)有明顯差異;但中、高濃度阿司匹林實(shí)驗組(0.5mmol/L、1.0mmol/L、1.5mmol/L)破骨細胞數量和骨吸收陷窩面積減少,差異有統計學(xué)意義。表明阿司匹林可抑制破骨細胞的分化成熟及骨吸收功能,且呈劑量依賴(lài)性。

　?。?）抑制破骨細胞RANK表達

　　Zhang等體外試驗研究不同濃度阿司匹林對體外培養大鼠破骨細胞(OC)RANK(核因子κB受體活化因子)表達的影響。采用RANKL和M-CSF誘導大鼠骨髓單核巨噬細胞破骨分化模型,給予不同濃度的阿司匹林(0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、1.5 mmol/L)和雌激素處理,而后進(jìn)行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色觀(guān)察細胞形態(tài)特征,掃描電鏡觀(guān)察骨磨片破骨細胞骨吸收陷窩,RT-PCR技術(shù)檢測破骨細胞表面RANK基因的表達,ELISA法檢測RANK蛋白的表達。結果示阿司匹林和雌激素都可以使大鼠破骨細胞成熟分化程度和骨吸收活性降低,抑制破骨細胞RANK基因和蛋白的表達,且阿司匹林的抑制作用具有劑量依賴(lài)性。表明阿司匹林對大鼠破骨細胞RANK的表達有抑制作用且呈劑量依賴(lài)性,從而抑制破骨細胞的成熟分化及骨吸收功能。

　?。?）抑制破骨細胞相關(guān)信號通道

　　Zeng等通過(guò)離體實(shí)驗探討阿司匹林對破骨細胞生成的影響及其分子機制。體外培養RAW264.7細胞,以100 ng/ml核激活因子κB(NF-κB)受體配體(RANKL)誘導培養,并同時(shí)添加不同溶度的阿司匹林(0,0.25,0.5,1.0,1.5 mmol/L)培養5天。在不同時(shí)間點(diǎn),通過(guò)抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色的方法來(lái)觀(guān)察破骨細胞誘導生成能力,用實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測其破骨細胞系標志基因,包括組織蛋白酶K(CTSK)、TRAP、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)和降鈣素受體(CTR)mRNA的表達。裂解不同培養條件的細胞并提取蛋白上樣,行western印跡檢測NF-κB通道蛋白的表達以及有絲分裂原激活蛋白激酶(MAPKS)通道蛋白的表達,通過(guò)免疫熒光的方法分析確定NF-κB的P65的核易位。結果顯示阿司匹林抑制RANKL誘導的破骨細胞生成,隨著(zhù)阿司匹林濃度增加,破骨細胞形成數量明顯減少；其標志性基因TRAP、CTSK、MMP9及CTR的mRNA表達均有所下調；磷酸化的P65、P50、IKB-a、P38以及氨基端激酶(C-JNK)和胞外信號調節蛋白激酶(ERK)蛋白表達均有所減少,而其非磷酸化的蛋白表達水平無(wú)明顯變化。阿司匹林同時(shí)對NF-KB P65的核易位也表現出抑制效果。表明在RAW264.7細胞系中,阿司匹林通過(guò)抑制NF-κB系統(P65、P50、IKB-a)和MAPKS系統(P38、C-JNK和ERK)通道的激活來(lái)抑制破骨細胞的生成,從而發(fā)揮治療骨質(zhì)疏松的作用，且在一定范圍內和阿司匹林濃度呈正相關(guān)。

　　小  結

　　大量動(dòng)物體內試驗及離體實(shí)驗研究表明，阿司匹林治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥療效肯定，主要表現為阿司匹林可提高去勢大鼠骨密度值，顯著(zhù)改善骨組織形態(tài)學(xué)、骨生物力學(xué)、骨代謝生化指標、骨代謝密切相關(guān)的細胞因子水平，影響骨質(zhì)疏松發(fā)生機制的信號通路轉導。且阿司匹林治療骨質(zhì)疏松具有雙向良性調節作用，既可達到與外源性雌激素相同的效果，又可避免外源性雌激素過(guò)量所出現的副作用。

　　近年來(lái)，阿司匹林治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的實(shí)驗雖然取得了較大進(jìn)展，但尚存在以下問(wèn)題：第一，阿司匹林治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的作用機理尚未完全闡明，目前已從骨代謝、細胞因子水平及破骨細胞相關(guān)標志基因表達水平等方面對其作用機制做了初步探討，下一步可繼續從破骨細胞及成骨細胞相關(guān)信號通路、基因水平等方面入手進(jìn)行更深入的研究，以揭示阿司匹林促進(jìn)骨形成、抑制骨吸收的效應機制。第二，仍需進(jìn)一步通過(guò)流行病學(xué)確定阿司匹林治療骨質(zhì)疏松的劑量多少及療程多長(cháng)才能達到有佳療效。從而為阿司匹林這一老藥治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥提供更多的研究基礎。